花芽原位杂交测试服务-武汉科锐诺(图)

原位杂交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。

2） 置换成30%的PBST溶液，放置5分钟

3） 置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次

4） 置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2） 用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。

3） 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。

4） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

2. 预杂交

1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的HYB+取代HYB－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

3. 杂交

1）吸去预杂交的HYB+，加上100ul已加入探针的HYB+溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，花芽原位杂交测试服务，探针结合越好，温度越高，背景越小。

基因芯片又称DNA芯片或DNA微阵列。其原理是在固体载体(硅片、玻片、硝1酸纤维素膜)上按照特定的排列方式集成大量已知DNA/cDNA片段，形成DNA/cDNA微矩阵。 　　基因芯片技术是一门新兴的技术，由于该技术能在一次实验中自动、快速、敏感地同时检测数千条序列，而且获得的序列信息高度特异、稳定。根据探针类型分为DNA芯片和cDNA芯片，前者用于检测基因突变，实现肿1瘤早期诊断、判断预后及治1疗;后者用于检测基因表达，对肿1瘤进行发现性分类和预测性分类。

分子病理学在蛋白质和核酸等生物大分子水平上，应用分子生物学理论、技术及方法研究疾病发生L发展的过程，从而为传统的病理学注入了生机。在如今的临床病理诊断过程中，运用核酸原位杂交、PCR技术、免1疫荧光、免1疫组织化学染色等技术，能够更加深化对疾病的本质认识，对于肿1瘤的诊断和治1疗也有着临床的指导意义。分子病理学诊断主要应用于以下几个方面：1、对于肿1瘤易感基因的检测，对于肿1瘤高危人群的筛检具有实用价值，如检测GSTπ基因以判定个体暴露于致癌物是的致癌危险性。2、肿1瘤相关病毒的检测，如采用原位杂交方法检测标本中HPV、EBER等病毒。

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