武汉科锐诺生物(多图)-植物茎原位杂交技术服务

分子病理学是与分子生物学、细胞遗传学等学科相互渗透，在蛋白质和核酸等生物大分子水平上研究疾病病因、发病机制、形态变化及功能损害等方面发生和发展规律的新的分支学科，对疾病的病因、发展、发病机制及形态变化，从传统形态学概念深入至分子或基因水平，分子病理已成为肿1瘤病理研究中重要的内容和手段。①细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；

适用场景

1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用；

2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点；

3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白；

4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽；

5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物；

6、绘制蛋白质相互作用图谱。

酵母双杂交技术的优点

1、无需纯化蛋白；

2、检测在活1细胞内进行，可以在一定程度上代表体内的真实情况；

3、检测的结果是基因表达产物的积累效应，因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用；

4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。

原位杂交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。

2） 置换成30%的PBST溶液，放置5分钟

3） 置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次

4） 置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2） 用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。

3） 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。

4） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

2. 预杂交

1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的HYB+取代HYB－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

3. 杂交

1）吸去预杂交的HYB+，植物茎原位杂交技术服务，加上100ul已加入探针的HYB+溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。