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外泌体研究开展的如火如荼。不论是 SCI 文章的发表还是各类基1金的申请，外泌体相关研究表现都非常亮眼。外泌体提取后，研究人员面临的一个重要问题就是，我提取的是不是外泌体？如果是的话，质量如何？

现阶段，对外泌体进行鉴定主要有三种主流的方法：电镜、粒径和 Western blot 分析靶标物。之前我们已经对外泌体电镜进行了总结，今天我们来看看外泌体的粒径分析。

外泌体粒径分析原理

外泌体粒径分析方法为纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle tracking Analysis， NT A)，其原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析，结合 Stockes-Einstein 方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NT A技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。相较于其他表征方式，NT A技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。

外泌体分离提取方案。主要方案包括：

1、差速超1速离心法；

适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品；

2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法；

适用于血1清、脑脊液等小体积的样品；

3、超滤提取法；

适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法，做进一步的提取。

外泌体是细胞外囊泡的一种，其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似，电镜下，显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中，通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括：透射电镜（形态鉴定）、NTA检测（粒径及浓度鉴定）、WB（分子标志物）。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一，可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好，纯度较高的外泌体样品，粒径分布在30-150nm，原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量，对每一个样品，都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日，可当天到样当天出结果。

外泌体的提取方式：

1、离心法：此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足。

2、过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样纯度不足。

3、密度梯度离心法：用此种方法分离到的外泌体纯度较高，但是前期准备工作繁杂

4、免1疫磁珠法：这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单，但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。

5、色谱法：此种方法分离出的外泌体大小均一，但设备特殊，应用不广泛。