胞外囊泡透射电镜检测-武汉科锐诺(图)

外泌体介导细胞间的信号交流，是目前外泌体研究中十分热门的领域。外泌体中有丰富RNA以及蛋白，其中RNA的种类包括miRNA，LncRNA，mRNA等[1]。大量文献报道，胞外囊泡透射电镜检测，这些RNA在细胞间的相互交流中发挥着巨大的作用。如，外泌体中miRNA可以调节下游细胞对胰岛素的敏感性。在研究中，作者培养脂肪组织巨噬细胞（ATM），并收集培养基中富含miR-155的外泌体，作用于下游的脂肪细胞和肌细胞。miR-155可以结合Argonaut蛋白，并募集下游的目标mRNA，从而影响细胞对胰岛素的敏感性和对葡萄糖的耐受性[2]。此外，外泌体中的LncRNA可以调控下游细胞的转录水平[3]，mRNA、蛋白等可以通过外泌体转运至下游细胞，并在胞内进行翻译

据国际细胞外囊泡学会（ISEV）在2014年的提议，外泌体鉴定3个标志：透射电镜（transmission electron microscope，TEM）、粒径（Nanoparticle Tracking Analysis， NTA）、蛋白标志物（Western Blot， WB）。

外泌体透射电镜TEM鉴定外泌体大小、形态，判断样本是否含有外泌体。

外泌体透射电镜分辨率为0.1~0.2nm，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，可观测样本中是否存在外泌体样结构（通常为茶托型或一侧凹陷的半球形），同时可测量外泌体大小。

检测平台：TecnaiTM G2 Spirit BioTWIN

检测结果：三张透射电镜图片，尽可能体现完整的外泌体形态（如有）

检测周期：10-15个工作日

iTRAQ (isobarictags for relative and absolute quantitation，同位素标记相对和绝1对定量)是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝1对定量技术。该技术使用8种（或4种）不同的同位素试剂来同时标记和比较8种（或4种）不同的蛋白质样品。这些试剂由3个不同的化学标签组成：报告部分，肽反应部分和平衡部分。报告部分为客户可按需选择标记个数，肽反应基团将iTRAQ标签与肽段的N-端基团和每个赖氨酸侧链相连，可标记所有酶解肽段，平衡部位可保证iTRAQ试剂标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比，因此改变任一iTRAQ试剂，不同同位素在标记同一多肽后在一级质谱检测，分子量都完全相同。而在串联质谱中，同重元素标记肽段平衡基团在二级质谱发生中性丢失。信号离子表现为不同质荷比的峰，因此，根据波峰的高度及面积，可以得到蛋白质的定量信息。

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